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TECNICAS DE DIAGNOSTICO MOLECULAR []
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Id:PE1.1
Autor:Sánchez Zúñiga, César Augusto; Beraún Milla, Yasmina.
Título:Estudios moleculares en el Hospital Almenara: Estudios realizados por el Laboratorio de Biomedica Molecular del Departamento de Patología Clínica^ies / Molecular studies at the Hospital Almenara: Studies done by the Laboratory of Molecular Biomedical of the Clinical Pathology Department
Fuente:Rev. cuerpo méd;17(2):35-35, dic. 2000. .
Descriptores:Biología Molecular
Técnicas de Diagnóstico Molecular
Límites:Humanos
Localización:PE1.1

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Id:PE14.1
Autor:Moreno Aristizabal, Natali; Agudelo Flórez, Piedad Matilde.
Título:Aplicación de las pruebas de PCR convencional simple y múltiple para la identificación de aislamientos de Leptospira spp. en Colombia^ies / Application of conventional and multiplex PCR assays for identification of isolates of Leptospira spp. in Colombia
Fuente:Rev. peru. med. exp. salud publica;27(4):548-556, oct.-dic. 2010. .
Resumen:Debido a las dificultadas asociadas con la identificación serológica de aislamientos de Leptospira ssp, se genera gran interés en la pruebas moleculares por su poder discriminatorio, reproducibilidad y fácil interpretación. Objetivo. Aplicary validar la prueba de PCR convencional, usando dos pares de iniciadores descritos previamente y dirigidos a los genes lipL32 (PCR simple) y secY/flaB (PCR múltiple), con el fin de evaluar su aplicación para identificar especies patógenas y saprófitas de Leptospira spp. Materiales y métodos. Para la estandarización de las pruebas de PCR se usó 22 cepas de referencia internacional y 12 aislamientos colombianos. Se determinó el nivel de detección de cada pareja de iniciadores, su especificidad frente a otros microorganismos causantes de enfermedades endémicas en Colombia y su capacidad de identificar especies dentro del grupo de Leptospira. Resultados. El límite de detección de la PCR simple lipL32 fue una dilución 1:10000 y para la PCR múltiple secY/flaB fue una dilución 1:100 para el gen secY y 1:1000 para flaB. La especificidad de todos los iniciadores fue de 100 porciento. La PCR simple lipL32, mostró amplificado específico para 21/22 cepas de referencia mientras que la PCR multiple secY/flaB lo fue para 18/22 cepas. De los 12 aislamientos colombianos, siete fueron positivos por PCR lipL32 y seis lo fueron por PCR secY/flaB. Conclusiones. Los resultados más consistentes fueron obtenidos con la PCR simple lipL32 tanto en límite de detección, especificidad y utilidad para la identificación de Leptospira spp, por lo que esta prueba es aplicable a la identificación molecular de aislamientos patógenos de Leptospira spp de diversas fuentes. (AU)^iesSerological identification of Leptospira ssp isolates is difficult to achieve. Thus, molecular testing may be of great interest thanks to its high discrimination power, reproducibility and easy interpretation. Objective. To implement and validate conventional and multiplex PCR methods (using primers directed against lipl32 and secY/flaB genes, respectively). To assess the capacity of PCR methods to identify pathogenic and saprophytic species of Leptospira ssp. Material and methods. 22 international reference strains and 12 colombian isolates were used. DNA was extracted with a commercial kit (Wizard). Specificity and sensitivity of both PCR methods were evaluated. Results. The maximum dilution of DNA samples allowing the detection of Leptospira ssp was determined to be 1:10000 for the PCR lipL32 and 1:100/1:1000 for the multiplex PCR secY/flaB. Both PCR didn’t detect DNA from microorganisms unrelated to Leptospira ssp. The lipL32 PCR specifically amplified a 423bp fragment from all pathogenic Leptospira reference strains, while the secY/flab PCR amplified both 285bp (secY) and 793bp (flaB) fragments from 18 reference strains. The lipL32 PCR detected 7/12 colombian isolates, while secY/flaB PCR detected both secY and flaB genes from 6/12 isolates. Conclusions. Best results were obtained with the lipL32 PCR, which displayed a better sensitivity and a better capacity to detect different strains than the multiplex PCR. The secY primers showed a poor specificity to pathogenic species and a poor sensitivity. Thus, lipL32 primers show high potential for molecular diagnosis of Leptospira spp in clinical and environmental samples. (AU)^ien.
Descriptores:Leptospira
Reacción en Cadena de la Polimerasa
Técnicas de Diagnóstico Molecular
Colombia
Medio Electrónico:http://www.ins.gob.pe/insvirtual/images/artrevista/pdf/rpmesp2010.v27.n4.a9.pdf / es
Localización:PE14.1; PE1.1

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Id:PE14.4
Autor:Asencios Solis, Luis Leoncio; Galarza Perez, Marco Antonio; Quispe Torres, Neyda Adriana; Vásquez, Lucy; Leo Hurtado, Elena; Valencia, Eddy; Ramírez, Juan; Acurio, Margoth; Salazar, Rosario; Mendoza Ticona, Carlos Alberto; Cáceres Rey, Omar Alberto.
Título:Prueba molecular genotype MTBDRplus, una alternativa para la detección rápida de tuberculosis multidrogorresistente^ies / Molecular test genotype MTBDRplus, an alternative to rapid detection of multidrug resistance tuberculosis
Fuente:Rev. peru. med. exp. salud publica;29(1):92-98, ene.-mar. 2012. ^btab, ^bgraf.
Resumen:La prueba molecular Genotype MTBDRplus, es un método que permite identificar las mutaciones más frecuentes asociadas con la resistencia a las drogas antituberculosas de primera línea: isoniacida (INH) y rifampicina (RIF). El objetivo de este estudio fue evaluar el desempeño de la prueba molecular con cultivos y muestras de esputo con baciloscopía positiva. Se evaluó 95 cultivos y 100 esputos con perfiles de resistencia previamente determinados por el método de referencia “proporciones agar en placa” (APP). La prueba molecular a partir de cultivos mostró una sensibilidad de 100 por ciento;97,5 por ciento y 96,9 por ciento para RIF, INH y multidrogorresistente (MDR) respectivamente; mientras que para esputo la sensibilidadfue de 95,7 por ciento; 96,8 por ciento y 95,2 por ciento para RIF, INH y MDR respectivamente. Se concluye que Genotype MTBDRplus es una herramienta muy útil para la detección rápida de la resistencia a INH y RIF simultáneamente (MDR) en un máximo de72 h a partir de esputo o de cultivo(AU)^ies.
Descriptores:Tuberculosis Resistente a Múltiples Medicamentos
Técnicas de Diagnóstico Molecular
Mutación
Isoniazida
Rifampin
Validez de las Pruebas
Perú
 Epidemiología Descriptiva
 Epidemiología Experimental
Límites:Humanos
Medio Electrónico:http://www.ins.gob.pe/insvirtual/images/artrevista/pdf/rpmesp2012.v29.n1.a14.pdf / es
Localización:PE14.1; PE1.1

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Id:PE1.1
Autor:Hurtado Alendes, Ana; Guevara Fujita, María Luisa; Acevedo Anabria, Carmen Laura; Fujita Alarcón, Ricardo.
Título:Optimización del diagnóstico molecular para la enfermedad de Huntington y la Hemocromatosis^ies / Optimization of the molecular diagnosis for Huntington's disease and the Hemocromatosis
Fuente:Horiz. méd. (Impresa);3(1/2):43-47, dic. 2003. ^bilus, ^btab.
Resumen:La caracterización genética-molecular de las enfermedades es útil para su diagnóstico, pronóstico y, en algunos casos, para diseñar estrategias de tratamiento; esto es posible por el análisis directo de las mutaciones responsables de estas enfermedades. La Enfermedad de Huntington (Corea) es una enfermedad neurodegenerativa que produce movimientos espásticos; rememorando una coreografía, conlleva a demencia y muerte. A nivel molecular, la enfermedad es causada por una expansión en el trinucleótido (CAG)n que se encuentra en el exon 1 del gen responsable HD en la región cromosómica 4p 16. La hemocromatosis hereditaria es una enfermedad primariamente hepática, que provoca cirrosis, diabetes y deficiencia cardiaca y alrededor de un tercio de pacientes muere por carcinoma hepatocelular. Más del 95 por ciento de casos de hemocromatosis en USA y EUROPA es provocado por mutaciones en el gen HFE (6p21), principalmente por las mutaciones C282Y y H63D. En los laboratorios del Instituto de Genética y Biología Molecular de la USMP se ha implementado el diagnóstico molecular de estas enfermedades como el inicio de un servicio que ya incluye otras anomalías genéticas. Tenemos interés en dirigirlo paulatinamente hacia las enfermedades y mutaciones más frecuentes en las poblaciones peruanas. (AU)^iesThe molecular characterization of the mutations causing hereditary diseases are important tools for diagnosis, prognosis and eventually treatment. Huntington's disease is a neurodegenerative disease producing spastic uncontrolled movements and is caused by the expansion of a trinucleotide (CAG)n with in the first exon of the gene HD located at 4p16. Hemocromatosis is a liver disease causing cirrosis, diabetes and heart problems, in addition one third of patients dies of hepatocarcinoma. Almost all cases of hemocromatosis are due to mutations in the gene HFE at 6p21, being C282Y and H63D the mutations most frequently detected in Europe and USA. We are establishing the molecular diagnosis of different diseases starting with Huntington disease and hemochromatosis as the begining of a service to the Peruvian comunity. (AU)^ien.
Descriptores:Enfermedad de Huntington/diagnóstico
Hemocromatosis/diagnóstico
Técnicas de Diagnóstico Molecular
Enfermedades Genéticas Congénitas
Medio Electrónico:http://www.medicina.usmp.edu.pe/horizonte/2003/Art5_Vol3_N1-2.pdf / es
Localización:PE1.1; PE264.1

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Id:PE14.1
Autor:Palomino Camargo, Carolina; González Muñoz, Yuniesky.
Título:Técnicas moleculares para la detección e identificación de patógenos en alimentos: ventajas y limitaciones^ies / Molecular techniques for detection and identification of pathogens in food: advantages and limitations
Fuente:Rev. peru. med. exp. salud publica;31(3):535-546, jul.-sept. 2014. ^bilus, ^btab.
Resumen:Las enfermedades transmitidas por alimentos, ocasionadas por microorganismos patógenos, constituyen un grave problema de salud pública a nivel mundial. Los métodos microbiológicos utilizados comúnmente en la detección de estos patógenos, de origen alimentario, son laboriosos y consume mucho tiempo. Esta situación, aunada a la demanda por resultados inmediatos y a los avances tecnológicos, ha conducido al desarrollo de una amplia gama de métodos rápidos en las últimas décadas. En base a esto, la presente revisión describe las ventajas y limitaciones de los principales métodos moleculares utilizados en la detección e identificación de microorganismos patógenos transmitidos por alimentos. Para ello, se consideró la actualidad de la información consultada, el análisis objetivo de la temática y su alcance. La literatura reciente reporta un número significativo de técnicas moleculares, alternativas, sensibles y selectivas para la detección, enumeración e identificación de microorganismos patógenos en alimentos, siendo la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) la plataforma más popular, mientras que la secuenciación de alto rendimiento se perfila como una técnica de gran aplicabilidad a futuro. Sin embargo, aun con todas las ventajas que ofrecen estas novedosas metodologías, no se deben pasar por alto sus limitaciones. Así, por ejemplo, los métodos moleculares no constituyen protocolos estandarizados, lo que dificulta su utilización en algunos casos. Por esta razón se debe trabajar arduamente para superar tales limitaciones y mejorar la aplicación de estas técnicas en matrices tan complejas como los sistemas alimenticios. (AU)^iesFoodborne diseases, caused by pathogenic microorganisms, are a major public health problem worldwide. Microbiological methods commonly used in the detection of these foodborne pathogens are laborious and time consuming. This situation, coupled with the demand for immediate results and with technological advances, has led to the development of a wide range of rapid methods in recent decades. On this basis, this review describes the advantages and limitations of the main molecular methods used in detection and identification of foodborne pathogens. To this end, we considered how recent the information was published, the objective analysis of the topic and its scope. Recent literature reports a significant number of alternative, sensitive and selective molecular techniques for detection, enumeration and identification of pathogenic microorganisms in food. Polymerase chain reaction (PCR) is the most popular platform, while high performance sequencing is emerging as a technique of wide applicability for the future. However, even with all the advantages of these new methodologies, their limitations should not be overlooked. For example, molecular methods are not standardized protocols, which hinders its use in some cases. For this reason, hard work should be done to overcome these limitations and improve the application of these techniques in complex matrices such as food systems. (AU)^ien.
Descriptores:Técnicas de Diagnóstico Molecular
Microbiología de Alimentos
Epidemiología Molecular
Contaminación de Alimentos
Calidad de los Alimentos
Medio Electrónico:http://www.rpmesp.ins.gob.pe:8080/files/journals/1/articles/4934/public/4934-6600-1-PB.pdf / es
Localización:PE14.1; PE1.1

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Id:PE13.1
Autor:Rojas Hinostroza, Giancarlo Eduardo
Orientador:Espinoza Blanco, Irma Adalberta; Roldán Gonzales, William Henry; León Sandoval, Segundo Ramos
Título:Evaluación de tres primeros para la detección molecular de Giardia intestinalis en muestras fecales humanas^ies Evaluation of three primers for molecular detection of Giardia intestinalis in human fecal samples-
Fuente:Lima; s.n; 2014. 39 tab, graf.
Tese:Presentada la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Facultad de Medicina para obtención del grado de Licenciatura.
Resumen:Introducción: Giardia intestinalis es el protozoario intestinal más común a nivel mundial y su diagnóstico parasitológico está basado en el examen microscópico, sin embargo, debido al carácter intermitente de la excreción del parásito en las heces el método puede revelar baja sensibilidad, esto ha motivado la búsqueda de nuevas alternativas de diagnóstico entre las que destacan aquellas que tiene como base la biología molecular. Objetivos: Evaluar 3 primers para la detección molecular de G. intestinalis en muestras fecales. Diseño: Se realizó un estudio observacional, de corte transversal. Lugar: Instituto de Medicina Tropical "Daniel A. Carrión", UNMSM. Procedimiento: Se evaluaron primers que amplifican las regiones de la beta-giardina y de la proteína de choque térmico 70 del ADN de G. intestinalis. Principales medidas de resultados: Se recolectó muestras fecales positivas y negativas a G. intestinales y a otros parásitos, las cuales fueron concentradas por centrifugación, luego almacenadas a -20 grados Centígrados y posteriormente analizadas mediante la técnica de PCR convencional. Resultados: Se estableció una temperatura de hibridación de 60 grados Centígrados para los primers de la beta-giardina y la proteína de choque térmico 70. La mezcla de reacción se estandarizó con las siguientes condiciones: CI2-Mg1.5 mM, primers 0.6 uM, dNTPmix 0.3 mM y taq polimerasa 0.75 U. El límite de detección de los primers fue de 87.3 ng/uL para beta-giardina, 359.5 ng/uL, para GHSP70-1 y 24.1 ng/uL, para GHSP70-2. Conclusiones: Se estableció una temperatura de hibridación y concentración de cloruro de magnesio común para los primers. Se observó un mejor límite de detección para el primer GHSP70-1 identificándose bandas en 7 diluciones con una sensibilidad y especificidad mayor que para el primer de la beta-giardina. (AU)^iesIntroduction: Giardia intestinalis is the most common intestinal protozoan worldwide and its parasitologic diagnosis is based in microscopic examination; nonetheless, due to the intermittent parasites excretion in the feces, this method could reveal low sensitivity, this has motivated the search of new diagnostic alterative such as those based on molecular biology. Goals: To assess 3 primers for the molecular detection of G. intestinalis in stool samples. Design: an observational, cross-sectional study was implemented. Settings: Tropical Medicine Institute "Daniel A. Carrion", UNMSM. Procedures: We assessed primer that amplifies beta-giardin and heat-shock protein 70 of the G. intestinalis. Main measures of: Positives and negatives stool samples for G. intestinalis and for other parasites were collected and then concentrated by centrifugation and stored at -20 degrees Celsius for further analysis using conventional PCR. Results: A 60 degrees Celsius hybridization temperature was established for the primers of beta-giardin and the heat-shock protein 70. The master mix was standardized with the following conditions: 1.5mM Cl2Mg, 0.6 uM primers, 0.3mM dNTPmix and 0.75U Taq polimerasa. Limit detections were 87.3 ng/uL for beta-giardin, 359.5 ng/uL for GHSP70-1 and 24.1 ng/uL for GHSP70-2. Conclusions: We established a common hibridization temperature and a magnesium chloride common for the primers. A better detection limit was established for the primer GHSP70-1, identifying bands in seven dilutions with sensitivity and specificity higher for the beta-giardine primer. (AU)^ien.
Descriptores:Heces
Giardia lamblia/diagnóstico
Técnicas de Diagnóstico Molecular
Estudio Observacional como Asunto
 Estudios Transversales
Límites:Humanos
Medio Electrónico:http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/cybertesis/4286/3/Rojas_hg.pdf / es
Localización:PE13.1; T, QX, 70, R78, ej.1. 010000098828; PE13.1; T, QX, 70, R78, ej.2. 010000098838



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